CAL技术的应用

2020-10-21 13:37阅读:

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  在临床上,通常由腹部或大腿吸脂获取脂肪组织后,经离心、消化和洗涤等步骤获得SVF,其中包含ADSC。然后,将其与脂肪组织按一定比例混合并移植至受区。也可以将SVF进行体外培养,得到贴壁生长的ADSC,取体外生长状态良好的ADSC与脂肪组织复合移植。由于CAL技术操作规范,易于自动化生产,因此目前已有产业化设备上市,使该项技术的推广与应用更为便利。
  一、应用SVF的CAL技术
  (一)脂肪抽吸
  研究发现,人类的腹部和大腿皮下脂肪中的ADSC最为丰富。因此,CAL技术常选取以上两个部位为脂肪供区的最佳选择。在无菌手术室内,利用肿胀溶液对脂肪抽吸部位行组织肿胀麻醉处理后,通过直径2.5~3mm的吸管以常规方法抽吸脂肪。经负压吸脂管吸出的混合物包含肿胀液成分、脂肪组织、结缔组织、血细胞以及其他组织碎片等。
  (二)SVF制备
  将抽吸脂肪分为两部分,其中一部分用于提取SVF,随后将提取的SVF与另一部分脂肪混合,混合物用于移植。因此,提取含有ADSC的SVF过程是CAL技术的关键性步骤。整个分离过程一般需要70~80min,基本过程如下。
  1、离心
  将抽吸获得脂肪的一半离心,通过离心的方法可使脂肪细胞、油脂和血细胞等成分分开。离心后,其混合液可分为上、中、下三层:
  上层,主要为油脂,其中含有三酰甘油和乳糜颗粒,这是脂肪细胞破碎后的产物;
  中间层,主要为纯化的脂肪;
  下层,含有血细胞、血浆、滤液等。此时中间层即为纯化的脂肪组织。脂肪组织的一部分保存备用,另一部分取出,继续以下步骤提出SVF。
  2、消化
  脂肪部分用等量的0.075%无菌胶原酶振荡消化(37℃,30min)。
  3、洗涤
  以磷酸盐缓冲液(phosphatebuffersaline,PBS)或生理盐水液反复洗涤后再离心,分离成脂肪部分和液体部分。弃去脂肪部分,保留液体部分。
  4、再洗涤
  以PBS或生理盐水液洗涤,离心。经过离心获得的底层有形细胞部分即为SVF,也就是富含ADSC的细胞混合物,除ADSC外,还有血液来源细胞、血管内皮细胞等。
  (三)脂肪组织-SVF复合物形成
  将另一半抽吸所得的脂肪与处理得到的SVF混合,静置15min,使ADSC充分吸附于脂肪上。这些脂肪类似于有活性的生物支架,作为移植物备用。分离的细胞需要经过数量和质量的严格检测,也可以抽取小部分SVF进行细胞培养以验证细胞的活性。
  (四)脂肪组织-SVF复合物移植
  按常规脂肪移植方法进行脂肪组织-SVF复合物移植。
  二、应用ADSC的CAL技术
  (1)同上步骤完成脂肪抽吸、SVF制备。
  (2)ADSC培养:将混合液接种于培养容器中,以细胞培养液进行培养,一般采用含10%胎牛血清的DMEM培养液。每2~3d换液1次。SVF中所含的较多的血细胞成分因不能贴壁生长,通过换液可以去除。贴壁细胞继续培养。待细胞生长到一定数量后制成悬液,再与抽吸的脂肪组织混合后进行应用。
  (3)脂肪组织-ADSC复合物形成:重新抽吸脂肪组织,将细胞悬液与其混合,静置15min,使ADSC充分吸附于脂肪上。
  (4)脂肪组织-ADSC复合物移植:按脂肪移植常规方法进行脂肪组织-SVF复合物移植。

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