1、血钙磷检测：骨质软化症的患者需要进行血钙磷检测常常会出现血钙磷的紊乱，一般来说血钙会降低，如患者有纳差，血磷也会降低。
2、骨密度检查：骨质软化症的患者由于血钙降低，骨密度会下降。
3、甲状旁腺激素检查：骨质软化症的患者做甲状旁腺激素检查主要是为了排除甲状旁腺激素分泌过低而导致的低钙血症，患者一般甲状旁腺激素会增加。
4、骨计量学检测：骨质软化症的患者确诊的金标准是骨计量学检测，它通过测卑骨形成率，可以推断骨骼的内部代谢过程。
5、影像学检查：X线平片显示全身骨骼密度普遍减低，骨骼畸形变，脊椎椎体上下缘凹陷，椎间盘增宽、两侧髋臼，坐骨、耻骨向内凹陷形成髋内翻，可并见耻骨联合向前凸出，在四肢常有膝外翻畸形，重者出现假性骨折线，表现为两侧对称存在，部分或完全贯穿骨骼宽约0.5mm透光线，但一般没骨痂形成。
6、骨代谢生化指标测定：不同原因所致的骨软化症和佝偻病的改变各异。
7、维生素D源性：血清钙水平明显降低，血磷水平可正常或轻度降低，伴继发性甲状旁腺功能亢进时，血甲状旁腺素水平增高；营养缺乏性佝偻病常有血清25-羟维生素D水平降低；维生素D代谢异常(1a-羟化酶缺乏)常会出现单纯1，25 -双羟维生素D3水平降低；维生素D受体基因突变者，1，25 -双羟维生素D3的水平升高。
8、磷源性：血钙水平通常在正常范围，而特征性的改变为血磷水平显著降低；血清25-羟维生素D水平和PTH水平可在正常范围，但也有部分患者血清1，25-双羟维生素D3水平可低于正常范围；肿瘤性低磷骨软化者，血成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平明显增高，几乎所有的佝偻病或骨软化症患者的血清碱性磷酸酶水平会显著升高。