心脏彩超是肥厚性心肌病最主要的诊断手段。室间隔不对称肥厚，而无心室增大为其特征。舒张期室间隔厚度大于等于15毫米或与后壁厚度之比大于1.3，需要考虑肥厚性心肌病。伴有流出道梗阻的病例，可见室间隔流出道部分向左心室内突出，二尖瓣前叶在收缩期前移，左心室顺应性降低，由于不同病例严重程度可以存在较大的差异，静息状态下室间隔厚度未达到上述标准，不能完全排除本病诊断，静息状态下无流出道梗阻者需要评估激发状态下的情况。部分患者心肌肥厚局限于心尖部，尤其以前侧壁心尖部为明显，如果不仔细检查，很容易漏诊。