1、体格检查：除一般查体之外，主要包括心脏听诊，通过心脏出现的杂音，能够对疾病进行一个初步的判断以及筛查。
2、X线检查：小型室间隔缺损无明显改变；中型缺损心影轻度到中度增大，以左室增大为主；大型缺损心影中度以上增大，以右室增大为主，肺动脉段明显突出，肺野明显充血。出现艾森曼格综合征时，肺动脉主支增粗，肺外周血管影很少。
3、心电图：小型室间隔缺损时心电图可正常或电轴左偏，中型室间隔缺损以左室肥大为主，大型室间隔缺损为双心室肥大或右心室肥厚，可伴有心肌劳损。
4、超声心动图：二维超声可从多个切面显示室间隔缺损的部位、数目和大小，是确诊本病的主要无创方法。
5、心导管检查：心导管检查用来准确评价肺动脉高压的程度、计算肺血管阻力以及分流量，进一步证实诊断以及进行血流动力学检查。