胚胎冷冻方法包括： 1、程序冷冻法：也称平衡冷冻法，是将胚胎放入冷冻液中，慢速降温至一个较低的温度，约在-35℃到-80℃的阶段，然后将它放入液氮中，是早期冷冻时主要采用的一种方法，但程序冷冻的降温过程较长，其中胚胎细胞内的水分易在此过程中形成冰晶，在解冻复温时也有形成冰晶的风险，冰晶会机械性损伤细胞膜和细胞器的膜结构，挤压细胞的骨架，对胚胎造成冷冻损伤，因此在程序冷冻过程中，细胞受到损伤的程度较大，复苏率约在70%； 2、玻璃化冷冻：近20年在程序冷冻的基础上又进一步突破，出现了新的冷冻方法，称为玻璃化冷冻，此方法主要是采用更高浓度及极其黏稠的冷冻保护剂处理胚胎，使胚胎在冷冻的过程中，从生理温度急速降温到-196℃，胚胎细胞内外液体瞬间冻结成玻璃化固体状态。与程序冷冻法相比，玻璃化方法冷冻过程中，胚胎细胞内的液体不会形成冰晶，从而避免了冰晶对胚胎细胞的物理化学损伤，获得了较好的冷冻效果，玻璃化冷冻胚胎复苏率通常达到95%以上，若冷冻囊胚，效果则更好，复苏率可达到99%以上，显著的高于程序冷冻方法，优势也较明显，所以越来越多的中心逐步开始使用玻璃化冷冻方法，也成为现阶段胚胎冷冻的主要方法。

胚胎解冻较主要的风险如下： 1、胚胎细胞在解冻过程中受到损伤，严重可导致胚胎无法复苏，胚胎复苏的标准通常是超过一半以上数量的细胞存活，即认为胚胎存活，否则判定胚胎复苏失败，如8细胞的胚胎，解冻后若有4个或4个以上细胞存活，即判定此胚胎存活，若仅有3个细胞球存活，即判定胚胎复苏失败。因胚胎细胞是还未分化的全能性细胞，若一个胚胎解冻后有个别细胞死亡，其它存活胚胎继续分裂后，即可较快替代已死亡细胞，不影响胚胎整体发育及妊娠，当半数以上细胞存活时，胚胎还可发育较好，但若死亡细胞数较多，胚胎损伤则较严重，即使存活下的细胞也难以代偿死亡细胞，导致胚胎发育过于迟缓，严重降低妊娠率； 2、胚胎复苏后能否继续发育，部分胚胎解冻后，虽已复苏，但可能自身受到一些无法用肉眼观察到的损伤，即失去了继续发育的能力，或潜在发育的能力较差，主要表现在卵裂速度迟缓或完全不进行卵裂，有时会逐渐凋亡，这些胚胎也无法达到妊娠目的。

在试管婴儿技术中，一个促排卵周期通常可获得较多个胚胎，但这些胚胎并非一定都能利用，只有可利用的胚胎才值得进行冷冻保存： 1、正常受精的胚胎：只有一个精子和一个卵子结合后形成的胚胎，若出现多个精子同时和一个卵子结合而形成的胚胎，则属于不正常受精的胚胎，存在染色体的异常，不可以冷冻； 2、胚胎的质量：虽然获得了较多胚胎，但每个胚胎的质量都不同，有好有坏，可从胚胎的发育速度、碎片数量及形态等各个方面来综合评估胚胎质量，只有达到一定级别的胚胎才会被选择冷冻，如卵裂期胚胎，一般胚胎发育到第3天，可达到6-8个细胞球，根据胚胎的形态和碎片多少，也可将它们分为4级，一级和二级胚胎属于较好的可进行冷冻，而三级和四级胚胎质量较差，一般不建议保存，囊胚期的胚胎评分又有所不同，主要是按照囊胚的扩张程度、内细胞团和滋养层细胞数量来进行评分，通常分为A、B、C三种类型，A、B级的囊胚可冷冻，而C级囊胚较差，不建议冷冻；胚胎发育的速度，以囊胚培养为例，取卵后5-7天内形成的优质胚胎可冷冻，而不能发育成囊胚的胚胎也无冷冻的价值。 质量较差的胚胎即使进行新鲜移植，其着床率和妊娠率均较低，经过冷冻解冻的过程，发育能力不仅无法得到改善，还会受到一定损伤，妊娠率会变得更低，所以在冷冻前对胚胎进行选择，只保存有价值的胚胎，将较差的胚胎淘汰，既能够提高冻胚移植效率，也可减轻患者的经济负担。

导致胚胎复苏后质量变差的原因主要如下: 1、与胚胎质量有关：胚胎质量会影响解冻的结局，优质的胚胎通常复苏率较高，细胞球死亡个数也较少，胚胎质量较差，如细胞数少，碎片多等情况下，复苏率也会降低。另外还与胚胎的耐受程度有关，如同一管冷冻的两个胚胎，一个可完全存活，另一个会有几个细胞发生损伤，质量好的胚胎也并非100%可复苏，也会出现复苏失败的情况，但现使用玻璃化冷冻后，此种情况出现的几率则较低； 2、冷冻技术本身原因：如程序冷冻方法，在胚胎缓慢降温过程中易产生冰晶，冰晶是冷冻过程中较重要的冷冻损伤，若形成较大的冰晶，会机械性损伤细胞膜和细胞器的膜性结构，挤压细胞骨架，对细胞造成致命伤害，甚至导致细胞死亡。程序冷冻胚胎的复苏率为70%左右，另外还有渗透性损伤及渗透性休克等，其它原因也会造成细胞死亡。由于此种方法复苏率不理想，现普遍使用玻璃化冷冻技术，用高浓度冷冻保护剂，以极快的速度迅速降温，使胚胎直接形成固体玻璃样状态，此过程中完全无冰晶形成，避免了由冰晶造成的伤害，复苏率大大提高，通常在95%以上。冷冻方法的发展和改进，极大提高了冷冻胚胎的解冻复苏率，获得了令人振奋的自身结局。但每种方法都有一些自身的局限性，仍然无法保证所有胚胎100%复苏，胚胎学家一直在努力改进和创新，如更安全的冷冻保护剂，更优化的操作程序，更先进的冷冻方法等，都希望可达到较好的冷冻解冻效果。

胚胎可保存冷冻多久这个问题暂时还无确切答案。人类辅助生殖技术发展的历史还较短，从1978年，全球首例试管婴儿诞生至今刚好40年，2017年11月，在美国诞生了一个已经被冷冻保存了25年的冰宝宝，这是目前世界范围内有记录成功诞生的冷冻时间最长的婴儿，在我国，已出生的最年长的二胎冰宝宝也已在液氮罐里保存了18年。从理论上讲，将胚胎保存在-196℃的液氮中安全可靠，既不会对胚胎产生伤害，也不会影响胚胎的发育潜能，无论是短期或长期冷冻的胚胎解冻后，在存活率、着床率、妊娠率方面均无显著的差异。总体而言，只需具备以下几个条件，如采用了较好的冷冻方法，现在广泛使用的玻璃化冷冻方法，第二，严格按照操作程序进行操作，第三，持续保持良好的保存条件。理论上胚胎可被保存上百年，甚至上千年，在解冻后依然可存活并继续发育，由此也确信，世界最年长的冷冻婴儿记录在未来的日子里会被不断地刷新。

胚胎冷冻是用超低温的方法将胚胎进行长期保存的技术。冷冻过程主要包括两个因素，一是冷冻保护剂，能够在冷冻的过程中保护胚胎细胞，预防或减轻冷冻损伤的物质。冷冻保护剂通常由一系列不同浓度的保护剂组成。第二是严格复杂的操作程序，使用冷冻保护剂，并按照操作步骤对胚胎进行冷冻前的处理，将保护剂逐渐渗透入胚胎的细胞中，使胚胎能够承受即将出现的温度急剧降低的过程而不受到损伤，经过一系列的操作程序后，胚胎可达到合适冷冻的状态，即可将它们放置在-196℃的液氮环境中进行长时间的保存，胚胎冷冻可以在精子和卵子正常结合形成胚胎以后的各个时期进行。在日常的工作中，多数实验室主要会选择两个时间段来进行此项工作，一个是取卵后第3天进行卵裂期的胚胎冷冻，另一个是取卵后5-7天进行囊胚期的胚胎冷冻，具体选择哪个时间段冷冻更加合适，需观察胚胎的质量、数量，以及每个患者自身的情况来进一步确定，患者身体各方面条件都合适时，胚胎学家会采用适当的解冻方法，将冷冻胚胎恢复至正常的生理温度，然后将它们移植进子宫腔中，发育成胎儿，胚胎冷冻保存技术已经成为辅助生殖技术中的重要组成部分。

冷冻胚胎的过程需特殊的冷冻保护剂，还需严格按照操作程序进行冷冻，冷冻技术经过多年的不断发展和改进，效果有了显著的提高，如现较多中心采用的玻璃化冷冻方法，胚胎存活率通常可达95%以上，囊胚存活率达99%以上，甚至接近100%，绝大部分胚胎经冷冻解冻过程均可复苏。冷冻胚胎解冻后的质量与新鲜胚胎无较大差别，解冻过程无法提高胚胎的质量，且在此过程中，胚胎可能会受到损伤，但无需过于担心，即使胚胎中个别细胞无法存活，影响也较小，因早期胚胎的细胞还未分化，具有全能性，只要其它存活的胚胎可正常生长和分裂，则会较快替补已死亡的细胞。另外，根据大量临床资料统计显示，冷冻胚胎移植的妊娠率和胚胎的种植率不低于，甚至高于新鲜周期移植，在胎儿出生体重、早产率、出生缺陷率等方面也无明显差异，因此，冷冻胚胎与新鲜胚胎的质量无较大差别，可放心接受冷冻技术。

在试管婴儿技术中常需用到促排卵技术，通过此项技术可在一个取卵周期中得到多枚卵子，通过受精和培养获得多枚可用胚胎。在新鲜的周期中，通常会选择1-2个较优秀的胚胎进行移植，剩余的需运用胚胎冷冻保存技术，具体如下： 1、剩余可利用胚胎的保存：在辅助生殖技术发展的初期，我国辅助生殖技术规范中规定，超过35岁或35岁以下第二次以上周期移植时，最多可移植3枚胚胎，其它的情况下最多只能移植1-2枚。随着辅助生殖技术进步，如囊胚培养技术的发展，临床妊娠率不断提高，与此同时多胎妊娠率的提高，给患者带来了一定的风险，现大力提倡减少胚胎移植个数，尤其鼓励单胚胎移植，因此较多患者均会有较多的胚胎剩余，需进行冷冻； 2、不适合新鲜移植：如卵巢过度刺激综合征的患者，取消了新鲜移植，有利于降低发生严重过激反应的风险，子宫内膜条件不好或宫颈炎症的患者也不适合进行新鲜移植，当患者出现感冒头疼或其它身体疾病时，也需进行胚胎冷冻，还有一些特殊的社会因素或心理因素造成的情况，如突发事件需及时处理，或一些人心里较紧张，出现心理障碍，也不太适合进行新鲜移植，此时也需进行全部胚胎冷冻； 3、生育力的保存：如恶性肿瘤患者在进行放化疗前，可提前冷冻胚胎，做好生育力的保存，在肿瘤治疗后，再进行胚胎移植，而这些胚胎由于未受到放化疗药物的影响，依然较健康； 4、计划生二胎：也可提前将胚胎冷冻，等到想生二胎时再进行解冻和移植； 5、患有家族性的遗传性疾病：需进行胚胎植入前遗传学诊断，这些胚胎需先进行活检，但活检后不可立刻得出是否正常的诊断，所以需先将活检后的胚胎冷冻，等诊断结果出来后，被诊断为正常的胚胎才能解冻并移植，减少不健康宝宝的出生。