梅毒确诊主要是通过梅毒血清学试验，通过化验血中是否存在梅毒螺旋体抗体来筛查，或者是诊断梅毒，包括特异性抗体和非特异性抗体。梅毒螺旋体血清试验属于梅毒确诊试验，梅毒螺旋体侵入人体之后，在血清当中可以出现梅毒螺旋体抗体，并可以终身存在。所以如果特异性梅毒螺旋体抗体阳性，就意味着患者现在体内感染了梅毒，可能需要治疗，或者患者过去感染过梅毒，已经治愈。
非梅毒螺旋体血清试验属于梅毒过筛试验，若结果为阳性，需要确诊试验来证实才能诊断梅毒，因为少数的病毒性肝炎、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、妊娠及老年人等均可以出现假阳性，部分梅毒感染者，如合并HIV感染的患者也可以出现假阴性，此试验的滴度变化还能作为疗效观察、复发和再感染的指征。