25羟维生素D测定主要是用来了解人体内维生素D的储存水平，维生素D缺乏与许多疾病有关，如小儿比较常见的维生素D缺乏性佝偻病、骨软化症，老年人尤其是绝经后妇女，与骨外伤病人容易多发的成人骨质疏松症以及肾性骨病等。
25羟维生素D测定可用于上述疾病的诊断、鉴别与治疗效果的监测，25羟维生素D测定还可用于与维生素D缺乏相关的病症，如癌症、心血管系统疾病、自身免疫性疾病、糖尿病，以及抑郁症的监测，还可用于维生素D过量或者维生素D中毒的诊断。