在进行阴道镜检查前，24小时内应避免阴道、宫颈操作以及治疗等，用以减少对检查部位的刺激和干扰。遇到有检查部位出血或者阴道、宫颈急性炎症时，也不宜行阴道镜检查。检查前，患者取膀胱截石位，用生理盐水湿润阴道窥器，暴露宫颈穹窿部，棉球轻轻擦拭宫颈分泌物，调整阴道镜于检查台的高度，以适合检查。将镜头放至距外阴10cm的位置，镜头对准宫颈，打开光源，调节焦距，使光线柔和，可以加用绿光，为了精确的检查血管，也可以加用红光。
检查时，为了区分正常与异常的鳞状上皮和柱状上皮，可以借助于以下的溶液，包括3%的醋酸溶液、碘溶液。3%醋酸溶液可以使柱状上皮迅速的膨胀、发白，并呈葡萄状改变，数秒钟后的鳞柱交界处非常清晰。碘溶液可以使正常的鳞状上皮着色呈棕褐色，非典型增生癌病变以及宫颈的柱状上皮不着色。观察的内容主要包括宫颈大小、糜烂样组织范围，以及宫颈黏膜有无外翻、上皮有无异常、病变范围、血管形态、毛细血管间距离等。