亚急性感染性心内膜炎采血前要严格做皮肤消毒，每次抽血10-20mL，同时做需氧、厌氧和真菌培养，培养基至少保留三周，并定期作革兰染色和次代培养。
血培养是诊断感染性心内膜炎最重要的实验室方法，可疑患者于第一日，至少每间隔一个小时采静脉血三次做培养。
如在第2-3天均阴性，而临床仍被怀疑为感染性心内膜炎，应再取两次以上静脉血和一次动脉血做培养，而后应用抗生素。
如已用抗生素，应在停药后一周内，取三次以上静脉血做培养，培养基应做相应的处理。