梅毒可以经过验血检查梅毒螺旋体血清试验来确诊，梅毒螺旋体血清试验属于梅毒确诊试验。梅毒螺旋体侵入人体以后，在血清中可以出现梅毒螺旋体抗体并终身存在，所以特异性梅毒螺旋体抗体阳性，就意味着患者现在体内感染了梅毒，可能需要治疗，或者患者过去感染过梅毒，已经治愈。
梅毒患者还可以取皮肤溃疡的渗出液或者淋巴结穿刺液，可以查到梅毒螺旋体，虽然检测率很低，但是可以辅助诊断。梅毒的检查还包括脑脊液的检查，主要适用于神经梅毒的诊断，包括脑脊液白细胞计数、蛋白定量、荧光螺旋体吸收试验和性病研究实验室试验、聚合酶链式反应、胶体金试验等。