糖耐量试验通常在早晨7-9点开始进行，受试者在空腹时采血，然后口服溶于300mL水内的五水葡萄糖粉，在五分钟之内喝完，从喝糖的第一口开始计时，分别于服糖后30分钟、60分钟、120分钟、180分钟采血测血糖。
在整个试验的过程中受试者不喝茶及咖啡，不吸烟，不做剧烈运动，不进食，口服葡萄糖耐量试验是公认的诊断糖尿病的金标准。在临床上发现可疑糖尿病的患者均应该进行口服葡萄糖耐量试验检查，可以了解患者的对糖代谢的调节能力，可以用于诊断到底是糖尿病还是糖调节异常。