腰椎穿刺定位，通常选择第4/5腰椎或者第3/4腰椎的椎间隙。因为脊髓圆锥位置基本是在第12胸椎和第1胸椎的位置，所以选择在第4/5腰椎或者第3/4腰椎的位置进行穿刺比较安全。

大部分正常人的髂嵴最高点，通常是和第4/5腰椎椎间隙相齐平，可以通过体表摸到髂嵴最高点进行连线，然后根据连线对准脊柱骨中间的凹陷位置，则是第4/5腰椎椎间隙的情况。垂直于体表进行穿刺，则是第4/5腰椎椎间隙的位置。如果对第4/5腰椎椎间隙穿刺比较困难，往上延一个阶段，可以定位到第3/4腰椎的椎间隙。