区分淋巴结和淋巴瘤，直接、有效的方法是淋巴结活检。淋巴结病理学活检，分为相对微创的淋巴结穿刺活检，以及淋巴结切除活检。穿刺活检具有局限性，但可初步区分淋巴结为良性还是恶性。
若穿刺活检淋巴结为良性，则切除活检可暂时不做。若穿刺活检淋巴结为恶性，较常见的是淋巴瘤或转移癌。若为淋巴瘤，穿刺活检常不能区分淋巴瘤类型，应进一步做切除活检，对淋巴瘤进行分型，因不同类型淋巴瘤治疗方案亦不同。
淋巴结和淋巴瘤的区分，应先观察淋巴结肿大的时间，观察淋巴结有无疼痛表现。若为时间较长的无痛性淋巴结肿大，需通过做淋巴结彩超观察淋巴结形态有无异常。若B超表现为淋巴结形态异常或正常淋巴结结构消失，则需做淋巴结活检。
