1、血常规：白细胞总数减少或正常，粒细胞减少，淋巴细胞增多。感染后粒细胞可增多。
2、血清学检查：一是取双份血清进行血凝抑制试验检查抗原或抗体作初筛试验，二是用ELISA或RIA方法查抗原或抗体，但敏感性和特异性较差。
3、核酸检测：临床标本经PCR检测，证实有猴痘病毒DNA。
4、病毒培养：用鸡胚绒毛膜尿囊膜分离病毒后鉴定出猴痘病毒。
5、电镜检查：在无其它正痘病毒感染情况下，电镜下病毒形态学观察到正痘病毒。
6、免疫组织化学技术：可检测到正痘病毒，并除外其它种病毒。