亚叶酸钙不属于化疗药物，但是属于化疗增敏剂。与氟尿嘧啶联合用药，可以提高氟尿嘧啶的主要化疗疗效，用于治疗胃肠道肿瘤的治疗。也可用于大剂量甲氨蝶呤化疗的解救治疗。另外，也可用于口炎腹泻，营养不良，妊娠或婴儿期引起的巨幼红细胞贫血，不适合维生素B12引起的巨幼红细胞贫血，但是，临床已经较少用于此适应症。目前，临床主要用于胃肠道肿瘤氟尿嘧啶化疗的增敏。