羟基维生素D叫25羟维生素D，反映了体内维生素D的营养状态，如果仅是偏高，通常对人体没有坏处。体内的维生素D有两种来源，一种是皮肤经过紫外线照射所形成，另外一种是从食物当中获取，两种来源的维生素D均没有活性，需要在体内肝脏和肾脏两次羟基化，才能发挥它的作用。
首先是在肝脏维生素D进行第一次羟化，变成了25羟维生素D，在肾脏进行第二次羟化，变成活性的1,25-双羟维生素D。25羟维生素D是体内含量最多的形式，半衰期最长，用来评价人体维生素D营养状态，一般大于150ng/mL才是维生素D中毒。通过测定25羟维生素D，如果仅仅是偏高，通常对人体没有大的影响，维生素D补充很少出现过量，一般每日补充维生素D2000单位，不会导致维生素D中毒。有研究显示，每天补充维生素D在10000U，共计五个月，也没有出现维生素D中毒的情况。
每天补充维生素D高达50000U才有可能出现维生素D中毒，可以表现食欲不振、恶心、腹泻、便秘，也可以出现烦躁、嗜睡、昏迷，有可能出现体温的变化，比如高热，甚至造成软组织的钙化，也可能出现血钙增高。在使用维生素D的时候，通过监测羟基维生素D的水平，帮助我们判断维生素D是否过量，还要避免活性维生素D使用过量。