强直性脊柱炎的诊断主要有两个关键的指标：一个是骶髂关节的影像学检查；另一个是人类白细胞抗原B27的测定。
第一、如果病人的骶髂关节影像学上的改变，比如X线片、CT片或者早期的核磁共振片，显示双侧骶髂关节炎2级或者单侧的骶髂关节炎3级，同时病人又有腰背部疼痛的症状或者交替性的臀腿痛、腰部活动功能障碍，就可以诊断强直性脊柱炎。
第二、B27的测定，如果病人有家族史，其父母、祖父母、外祖父母，或有血缘关系的人曾经确诊过强直性脊柱炎，其B27又是阳性，加上有腰背僵硬疼痛和交替性臀腿痛、腰椎活动功能障碍、外周关节的炎症，就可以确诊得了强直性脊柱炎。