25羟维生素D能检查体内维生素D的营养状态，体内的维生素D有两种来源：一、由皮肤、表皮经过紫外线照射形成；二、食物中获得。两种来源的维生素D均没有活性，需要在体内先后经过肝脏和肾脏两个部位，装上两把羟，也叫化学基团，即羟基，才能发挥它的作用。
首先是在肝脏，维生素D进行第一次羟化，形成25羟维生素D，然后在肾脏进行第二次羟化，形成具有活性的1,25-二羟维生素D3。25羟维生素D是体内含量最多的维生素D形式，半衰期也最长，是用来评价人体维生素D营养状态的指标，通过化验静脉血所获得。一般认为25羟维生素D在30-60ng/ml是维生素D营养充足，20-30ng/ml是维生素D不足，20ng/ml以下是维生素D缺乏，如果大于150ng/ml，考虑维生素D中毒。