1、病史询问、查体：家族中肿瘤性疾病史是否存在，工作、生存环境中是否存在有害物质或辐射。查体判断肿瘤大小、疼痛情况、神经系统检查、淋巴结检查。
2、组织病理学检查：组织病理学检查可以为尤文肉瘤的诊断，提供更为确切的依据。通过穿刺、切除活检、手术等方法获得病理组织样本。组织病理学检查包括检查组织细胞形态、免疫细胞化学特征、细胞遗传学特征、分子生物学特征等。由于尤文肉瘤具有典型的染色体变异的遗传学特征，因此，特异性染色体是尤文肉瘤的重要诊断特征，通常通过免疫荧光染色的方法进行检查。
3、脏器功能及常规检查：
（1）生化及动态红细胞沉降率检查：需要检查肝肾功能、乳酸脱氢酶、 电解质、 动态红细胞沉降率等。肿瘤负荷大的尤文肉瘤患者，可能会出现血尿酸及乳酸脱氢酶水平升高。
（2）心电图及心脏彩超检查：用于检查患者的心脏功能。
（3）血常规检查：如果肿瘤侵犯骨髓，患者常会出现白细胞升高、血红蛋白及血小板减低。
（4）凝血功能检查：用于在治疗前了解患儿的凝血功能，以及是否有出血和血栓。
4、影像学检查：
（1）X线平片：尤因肉瘤通常表现为边界不清的破坏性病变，10%~15%的病例在诊断时有病理性骨折，可以通过X线平片进行检查。
（2）CT检查：相对于X线平片，CT可以更好地显示皮质破坏和软组织病变的范围，适用于骨外尤文肉瘤，同时，可以了解有无肿瘤出血及炎症改变，也可通过胸部CT扫描，以评估肺部是否有肺部转移。
（3）磁共振成像：相对于X线平片和CT，磁共振成像可以更好地分辨肿瘤的大小、局部骨内和骨外病变的范围，以及筋膜面、血管、神经和器官与肿瘤的关系，为之后手术或放疗确定范围。头部磁共振成像可用于了解是否存在颅内转移。
（4）B超：B超可用于了解原发及转移部位肿瘤大小、性质、肿瘤范围、供血情况及与周围组织的关系，是最为无创且方便的影像学检查。
（5）PET-CT：有条件的患儿，可以通过PET-CT进行全身性的检查，对肿瘤进行初始分期的评估。
（6）骨扫描：如果患儿全身肢体疼痛症状明显，有条件者可行放射性核素骨扫描，以评估全身骨骼是否存在多发性病变。如果已进行PET-CT，则不需要再做骨扫描。