DNA连接酶的作用主要是将DNA片段连接起来，但是不同的DNA连接酶，其具体的连接作用以及作用片段不同，需要进行区分。

DNA连接酶主要包括E.coli DNA连接酶、T4DNA连接酶，E.coli DNA连接酶是从大肠杆菌中分离得到的，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，而不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。T4DNA连接酶既可以“缝合” 双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。

另外，限制性核酸内切酶和DNA连接酶都作用于磷酸二酯键，但是限制性内切酶打开此键，而DNA连接酶使其重新形成。DNA连接酶最早于1967年由三个实验室同时发现，经过科学家几十年的研究发现，目前在病毒、细菌和真核生物体内都发现了DNA连接酶，不同类型的DNA连接酶的作用机制不同。

一般情况下，根据DNA连接酶催化反应所需的能量来源可以把DNA连接酶分为腺苷三磷酸(ATP)依赖型和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)依赖型,腺苷三磷酸依赖型DNA连接酶广泛存在于真核生物、古细菌、真细菌和病毒中,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸依赖型DNA连接酶则分布在古细菌、真细菌和病毒中。

如果需要进行DNA连接酶的检测，可以先到医院的内科就诊，通过医生问诊等了解情况后，再决定是否需要进行DNA连接酶的检查。