分枝杆菌的培养也是按照分枝杆菌的生长规律，依据分枝杆菌对营养和代谢所需要的条件，能够营造出一个有利于分枝杆菌生长，而抑制其它细菌生长的环境，达到分离的目的。
根据分枝杆菌培养基的不同，主要有固体和液体培养的方法。固体培养方法是用固体培养基，酸性培养基，利用分枝杆菌有较厚的细胞壁，所以能够耐受酸或者碱的特点。
在国内目前主要用碱性消化液处理，所以用的培养基是酸性培养基。碱性消化液处理以后就可以直接把消化液接种在酸性培养基上，酸性培养基就能中和碱性标本处理液，分枝杆菌就能在酸性培养基生长。
液体培养基一样有前处理的过程，但是主要用于自动化分枝杆菌的培养系统，通过仪器检测的是分枝杆菌生产过程中产生的化学信号等的变化，自动监测结果。
接种后一般固体培养基要2-4周出阳性报告，8周出阴性报告，而液体培养基1-2周出阳性报告，6周出阴性报告。
